一、课程的性质、地位和任务

生物化学及分子生物学是研究生物体的化学组成及其在生命过程中的化学变化与生命现象关系的科学，又是开创生命科学新纪元的带头科学之一。它的发展不仅从理论上深刻揭示了生命活动的本质，而且日益深入生产和生活的许多领域。因此，它是高等农业院校植物生产类各专业一门十分重要的专业基础课。通过学习生物化学及分子生物学这门课程，使学生系统掌握生物化学及分子生物学基本理论和基础知识，掌握生物化学及分子生物学基本实验技能。

二、实验教学目的和基本要求

通过生物化学及分子生物学实验课教学，使学生掌握生物化学及分子生物学常用实验基本操作技术；在实验教学中，增加综合性、设计性实验，减少验证性的实验，使学生更好理解生物化学及分子生物学的基本知识和基本理论；培养学生分析解决实际问题的能力和创新能力。

要求学生在实验前认真预习，了解实验的基本原理和主要操作步骤。实验中认真听教师讲解，实验中正确操作，能分析和解决实验中出现的问题。正确书写实验报告，并对结果进行分析讨论。

三、实验学时分配

根据植物生产类专业等教学计划，本实验课程的总学时数为64学时。

四、实验考试考核办法

实验课采用考查形式评定成绩，分为优秀、良好、及格和不及格四等。考查内容包括：实验预习、实验操作、分析和解决实验中出现问题的能力、实验结果和实验报告等。

 

五、实验项目一览表

生物化学实验项目一览表

 

 

六、实验教学内容

实验一    蔬菜 糖含量的测定（蒽酮法）

1．掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和技术；

2．熟悉721、7230型分光光度计的使用；

3．清楚蒽酮法测糖含量的注意事项；

4．了解其他的同类测定方法。

1．蔬菜中可溶性糖的提取；

2．蒽酮比色法测定糖含量；

3．实验报告书写及结果分析；

1．掌握721或7230型分光光度计的操作。

2．掌握蒽酮比色法测定糖含量的原理、方法和注意事项。

3．提交实验报告，并分析讨论。

实验二     球蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

1．学习蛋白质电泳的一般原理与方法。

2．掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白技术。

3．熟悉电泳仪的使用方法。

1．血清的制备。

2．血清蛋白电泳分离。

3．了解各种电泳方法和电泳仪的作用。

1．掌握蛋白质电泳的原理。

2．了解影响蛋白质电泳因素。

3．醋酸纤维素薄膜电泳的优缺点。

4．绘出血清蛋白电泳分离图谱。

实验三    水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定

1．学习染料结合法测定蛋白质的原理和方法。

2．熟悉721分光光度计的使用方法。

3．掌握离心机、旋光仪的使用方法

4．掌握用旋光法测定谷物淀粉含量的原理和方法。

1．制作蛋白质标准曲线。

2．溶液抽提和离心提取蛋白质。

3．考马斯亮兰法测定蛋白质含量。

4．学习旋光仪的原理和使用方法。

5．谷物淀粉含量的测定。

1．掌握考马斯亮兰测定蛋白质含量的原理和方法。

2．根据蛋白质的溶解性选择溶剂。

3．熟悉标准曲线的制作方法。

4．掌握旋光仪的使用方法。

5．旋光法测定谷物淀粉含量的注意事项。

6．提交实验报告，并分析讨论。

 

实验四    水稻萌发种子及幼苗中淀粉酶和过氧化氢酶活性的测定

1．学习和掌握淀粉酶、过氧化氢酶的测定方法，了解水稻生长与之代谢的关系。

2．熟悉α-淀粉酶与β-淀粉酶的特性及活性测定的原理。

3．掌握了解离心机和恒温水浴锅使用方法。

4．掌握滴定管的操作。

1．淀粉酶粗酶液和过氧化氢酶粗酶液的制备。

2．酶促反应水解淀粉。

3．α-淀粉酶和β-淀粉酶活性测定。

4．酶促反应分解过氧化氢。

5．过氧化氢酶活性的测定。

1．怎样分别测定α-淀粉酶和β-淀粉酶。

2．酶活性的大小如何表示。

3．过氧化氢酶活性的表示方法。

4．过氧化氢酶促反应的最适条件是什么？

5．提交实验报告，并分析讨论。

实验五    植物组织中核酸含量的测定（定磷法）

（一）目的和要求

1．掌握测定核酸含量的定磷法的原理和操作方法。

2．掌握消化技术。

1．核酸的提取。

2．核酸的消化：将核酸中的有机磷转化为无机磷。

3．定磷法测定核酸的含量。

1．掌握核酸的测定原理和方法。

2．定磷法测定核酸含量的注意事项。

3．提交实验报告，并分析讨论。

 

实验六    植物组织中氨基移换反应及氨基酸的层析分离

1．了解氨基移换反应的特点和意义。

2．掌握纸层析分离氨基酸的原理和操作技术。

1．转氨酶粗酶液的制备

2．氨基移换反应

3．纸层析分离氨基酸技术

1．说明转氨基作用的概念、特点及意义

2．掌握纸层析的基本原理和方法

3．提交实验报告，并分析讨论实验结果。

 

实验七    不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶电泳分析

1．了解同工酶的概念和意义；

2．掌握不连续管状聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和操作技术；

3．掌握过氧化物同工酶的提取、电泳及染色技术。

4．掌握不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的差异

1．不连续管状聚丙烯酰胺凝胶的制备

2．过氧化物同工酶的提取及电泳分离

3．过氧化物同工酶的染色及电泳图谱观察

4．不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的差异的比较

 

1．不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和方法

2．  不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的差异的比较分析

2．同工酶分析有何重要理论和实践意义

3．提交实验报告，并分析讨论实验结果。

 

实验八    SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量

1．熟悉SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理；

2．掌握SDS-聚丙烯酰胺垂直板状凝胶的制备；

2．掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量的原理和操作技术。

1．垂直板状SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备

2．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定标准蛋白质和未知蛋白质的分子量

3．绘制标准蛋白质分子量对数与电泳迁移率图

4．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定未知蛋白质分子量的电泳迁移率图。

1．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的原理；

2．垂直板状SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的注意事项；

3．正确绘制出分子量对数对电泳迁移率图

4．提交实验报告，并分析讨论实验结果。

 

 

实验九   植物组织中DNA的分离纯化及紫外检测

1．  掌握植物DNA分离纯化的基本原理和操作技术；

2．  学会使用紫外分光光度计

3．  掌握DNA纯度的检测方法。

1．  植物基因组DNA的提取

2．  植物基因组DNA的分离纯化

3．用紫外分光光度法检测DNA的纯度

 1．掌握植物DNA提取、纯化原理和操作步骤

2．根据DNA的纯度指标A ₂₆₀ /A ₂₈₀ ≥1.8，DNA片段大于20kb考核实验结果

3．提交实验报告，并分析讨论实验结果。