一、课程的性质与任务

植物细胞工程实验技术一般包括植物细胞组织离体培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、外源基因转移技术等一系列重要的基础技术。通过实验课程的学习，使学生系统掌握该门学科的实验原理、实验技术与方法等基础知识，结合科研实际以及最新研究动态，使学生对本课程有一个全面的了解。

二、实验的目的与基本要求

通过本课程的学习使学生掌握植物细胞工程技术的基本原理和实验操作方法，掌握植物细胞体外培养技术，结合科研和生产实际，提高学生分析问题、解决问题的能力。以适应今后在教学、科研和生产开发等各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。

在实验教学过程中，要求学生学习态度严谨，操作动作规范，观察记录耐心细致，独立思考，综合分析实验结果，充分理解后认真地完成实验报告。

三、实验考核方式及办法

实验课采用平时考查及期末考试方式评定成绩。

实验成绩评分标准分为100分。

考查内容包括：实验预习、实验操作、实验报告等。

考试内容包括：实验配方计算及实验现场操作考核。

    细胞工程实验技术教学40学时（10次实验）。学时分配见下表：

 

 

 

 

实验一   培养基母液配制

（一）实验目的和要求

1．了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类

2．初步掌握培养基母液配制方法

（二）实验内容

1．无机大量元素母液的配制

2．无机微量元素母液配制

3．铁盐母液配制

4．有机母液母液配制

5．激素母液配制

（三）教学方式

教师讲解各种的母液的配制方法和注意事项，学生分组操作

（四）考核要求

掌握MS培养基母液基本成分及配制方法

 

实验二   培养基配制与灭菌

（一）实验目的和要求

学习掌握培养基配制方法与灭菌操作

（二）实验内容

1．MS培养基配制（具体配方根据实验材料和培养目的决定）

2．MS培养基、无菌水、无菌纸灭菌

（三）教学方式

教师示范讲解培养基配制流程和注意事项，灭菌方法和注意事项，学生分组操作

（四）考核要求

掌握培养基配制方法、步骤与灭菌操作过程

 

实验三   植物器官愈伤组织诱导

（一）实验目的和要求

1．了解无菌培养对实验材料消毒、接种的要求

2．初步掌握植物外植体材料灭菌方法及接种操作技术

3．了解外植体愈伤组织诱导过程

（二）实验内容

1．接种前对外植体进行消毒等准备

2．在超净工作台上进行接种

3．将实验材料放置于培养室中进行培养与观察

（三）教学方式

教师示范操作讲解外植体消毒过程，超净工作台上接种外植体的方法、技巧和注意事项，学生独立进行操作

（四）考核要求

初步掌握植物外植体材料灭菌方法及接种操作技术

 

实验四   植物愈伤组织增殖

（一）实验目的和要求

1．进一步熟练掌握植物外植体材料接种（继代培养）操作技术

2．了解愈伤组织增殖培养及继代培养的操作过程

（二）实验内容

1．接种前准备好相应的培养基

2．将上次实验诱导出的愈伤组织接种到新配制的增殖培养基中

3．将实验材料放置于培养室中进行培养与观察

（三）教学方式

教师示范操作讲解在超净工作台上愈伤组织切割和继代培养方法，学生独立操作

（四）考核要求

进一步熟练掌握植物外植体材料接种（继代培养）操作技术

 

实验五   植物愈伤组织分化

（一）实验目的和要求

了解愈伤组织离体条件下形态发生、器官再生作用。

（二）实验内容

1．根据实验材料特点配制好愈伤组织分化培养基

2．将愈伤组织在超净工作台上转接到分化培养基中

（三）教学方式

教师示范操作讲解，学生独立操作

（四）考核要求

进一步掌握无菌操作技术，了解愈伤组织离体条件下形态发生、器官再生作用。

 

  实验六   植物器官型快速繁殖培养

（一）实验目的和要求

了解植物快速繁殖的方式之一器官型的基本原理及操作技术。

（二）实验内容

1．百合新鲜材料灭菌

      2．新鲜百合接种诱导不定芽产生

3．继代培养使不定芽增殖或生根

（三）教学方式

教师示范操作讲解百合新鲜材料的消毒的方法及接种技术，学生独立操作。教师示范操作讲解百合继代增殖培养的技术要点。

（四）考核要求

了解掌握离体无性繁殖器官发生方式中器官型的特点。

 

          实验七   花药培养及花粉发育时期的鉴定

（一）实验目的和要求

掌握植物花药培养的基本原理及操作要领。

（二）实验内容

1．花药培养预处理、消毒及在超净工作台上接种

2．新鲜花粉粒取材及临时制片，在显微镜下观察花粉粒各发育时期的特征，进行鉴定

（三）教学方式

教师示范操作讲解花药新鲜材料取材方法及接种技术，学生独立操作。教师示范操作讲解新鲜花粉粒取材及临时制片技术，讲解显微观察花粉粒方法。

（四）考核要求

1．了解花药（粉）培养诱导花粉形成愈伤组织过程及再生植株条件

2．了解花粉发育各时期形态

 

实验八   植物茎尖培养

（一）实验目的和要求

掌握植物茎尖培养的目的及操作技术。

（二）实验内容

1．新鲜材料野外取材

2．新鲜材料的消毒处理，解剖镜下剥离茎尖

3．茎尖接种

（三）教学方式

教师示范操作讲解新鲜材料野外取材方法、茎尖剥离技巧，学生独立操作

（四）考核要求

1．了解生物脱病毒最有效的方法茎尖培养过程

2．初步掌握茎尖剥离技术

 

实验九   悬浮细胞培养

（一）实验目的和要求

了解植物悬浮细胞培养的目的意义及实验方法。

（二）实验内容

1．液体培养基的配制及分装

2．愈伤组织的处理和接种

（三）教学方式

教师示范操作讲解，学生独立操作

（四）考核要求

了解液体培养建立细胞悬浮培养系的过程

 

实验十   原生质体培养

 

（一）实验目的和要求

了解植物原生质体培养的目的意义及培养技术。

（二）实验内容

1．叶肉原生质体的分离和培养

2．愈伤组织原生质体的分离和培养

（三）教学方式

教师示范操作讲解，学生独立操作

（四）考核要求

掌握植物原生质体分离和培养的基本方法，并对培养的结果进行初步观察。

 

教材及主要参考资料

1．指导书：细胞工程实验指导（自编，主编刘清波）

2．参考资料： 《植物组织培养》  吴殿星，胡繁荣．

              《植物组织培养》  陈世昌．

              《植物细胞工程实验技术》  孙敬三，朱至清．

《植物组织培养教程》  李浚明．

《植物细胞工程实验技术》  孙敬三，桂耀林．

《植物组织培养手册》  颜昌敬．

                  《实用植物组织培养技术教程》  曹孜义，刘国民．

《植物组织培养实用技术》  朱建华，彭士勇．

《植物细胞工程原理与技术》周维燕